凱氏定氮儀微量蛋白檢測(cè)實(shí)驗(yàn)操作步驟可以分成消化 蒸餾 滴定三大步驟。

　　凱氏定氮儀微量蛋白檢測(cè)實(shí)驗(yàn)操作步驟


　　第一步：消化


　　將預(yù)先稱量好的固體硫酸鉀/硫酸銅催化劑粉末約6g（可適當(dāng)加量）小心加入洗凈干燥的消化管底部；分別將樣品1、2和空白對(duì)照（約2mL）各兩份用分析天平差減法直接倒入消化管底部，記錄各組重量；用量筒小心稱取濃硫酸16mL加入各消化管底部。將消化管放在管架上，放入消化爐，啟動(dòng)通風(fēng)櫥。設(shè)置消化溫度時(shí)間曲線：170℃（根據(jù)樣品碳化和沸騰的情況，可適當(dāng)提高或降低預(yù)消化溫度，并盡量避免樣品碳化沸騰掛壁以提高檢測(cè)準(zhǔn)確度），30min——250℃，10min——370℃（為保證消化效果，可根據(jù)情況適當(dāng)提高至400℃以上），120min。當(dāng)消化管內(nèi)出現(xiàn)穩(wěn)定的恒沸白色酸霧并回流時(shí)，可蓋上消化管蓋以減少硫酸損失。當(dāng)樣品被消化為明亮的藍(lán)綠色或綠色液體時(shí)，即可停止消化，待其冷卻至室溫后，取出蒸餾，關(guān)閉通風(fēng)櫥。


　　第二步：蒸餾


　　向凱氏定氮儀的三個(gè)儲(chǔ)液桶中分別加入足量的35%NaOH、2%H3BO3和蒸餾水（根據(jù)處理樣品量，至少1L），旋緊儲(chǔ)液桶蓋子。開(kāi)機(jī)，打開(kāi)循環(huán)水，不放入樣品，預(yù)蒸餾2min。向樣品管中小心加入20mL蒸餾水以稀釋硫酸，待其變?yōu)槊髁恋乃{(lán)色溶液時(shí)，小心放入蒸餾架，卡緊卡槽時(shí)注意將消化樣品管口卡緊以防止氨蒸氣流失；向500mL接收三角瓶中加入少量（約0.6mL）混合指示劑，并設(shè)定加硼酸12s，加堿8s，蒸餾8—9min，保存設(shè)置后啟動(dòng)儀器。當(dāng)氨蒸氣隨冷凝水流出時(shí)（注意氨蒸氣管出口浸沒(méi)于接收三角瓶的硼酸溶液中），接收瓶中的硼酸溶液會(huì)由玫紅色變?yōu)樗{(lán)色，待蒸餾完畢，用蒸餾水將氨蒸氣管出口的殘液沖洗入接收瓶后取出待測(cè)。將樣品管取出，小心倒入水槽，并及時(shí)清洗。放入下一個(gè)樣品管和接收瓶，重復(fù)以上操作。蒸餾完畢后，關(guān)閉循環(huán)水。待蒸餾水冷卻后放出。如短時(shí)間內(nèi)不再使用定氮儀，應(yīng)用蒸餾水替換酸液和堿液，重復(fù)加酸加堿過(guò)程以清洗酸堿管路，維護(hù)設(shè)備。


　　第三步：滴定


　　用0.1NNaOH、0.1NHCl、蒸餾水分別潤(rùn)洗酸式滴定管各三次，最后用0.01037N滴定用標(biāo)準(zhǔn)HCl潤(rùn)洗兩三次。加入0.01037N滴定用標(biāo)準(zhǔn)HCl，并小心放液至0刻度。開(kāi)始滴定，左手控制滴定速度，右手不斷搖動(dòng)混勻三角瓶中溶液。（可預(yù)先對(duì)樣品消耗鹽酸量有一個(gè)大致的估計(jì)，即每毫升0.01N鹽酸可滴定約0.14mg氮）臨近滴定終點(diǎn)時(shí)溶液開(kāi)始由藍(lán)色變?yōu)樗{(lán)灰色，在最后一滴或半滴時(shí)微微呈現(xiàn)紫紅色。視線與滴定管水平時(shí)讀取并記錄鹽酸消耗量。用0.01037N滴定用標(biāo)準(zhǔn)HCl補(bǔ)滿至0刻度后，可滴定下一個(gè)樣品。以標(biāo)準(zhǔn)硫酸銨檢測(cè)的蒸餾回收效果，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：當(dāng)?shù)繛?mg時(shí)，以1500W蒸餾器蒸餾8min，平均氮回收率為96.9%；以1500W蒸餾器蒸餾9min，平均氮回收率可達(dá)100%，蒸餾回收效果理想。建議對(duì)于低蛋白含量樣品測(cè)量而言，降低蒸餾器功率，并適當(dāng)延長(zhǎng)蒸餾時(shí)間可進(jìn)一步改善回收率，從而使結(jié)果重復(fù)性更好。